2株产气肠杆菌临床株对厄他培南耐药机制的研究

目的研究2株产气肠杆菌临床株Ea293和Ea2880对厄他培南耐药的机制。方法采用微量肉汤稀释法测定最低抑菌浓度（MIC）,应用KB法检测菌株对美罗培南、亚胺培南及厄他培南的耐药性，改良Hodge试验检测碳青霉烯酶；聚合酶链反应（PCR）扩增碳青霉烯酶基因（KPC，IMP1、2组，VIM）和广谱及超广谱β内酰胺酶基因(TEM，SHV，CTXM1、2、9组ESBLs),并进行序列分析；十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDSPAGE）进行细菌外膜蛋白分析，并对外膜蛋白基因OmpE36进行PCR扩增及序列分析。结果药物敏感试验显示，产气肠杆菌Ea293和Ea2880均对厄他培南耐药。PCR扩增4种碳青霉烯酶基因和5种广谱及超广谱β内酰胺酶基因,仅Ea2880的SHV和CTXM9组ESBLs基因阳性，SHV基因的PCR产物测序为SHV11型广谱酶。细菌外膜蛋白SDSPAGE结果显示，与碳青霉烯类抗生素敏感的产气肠杆菌Ea1885相比，Ea293和Ea2880均缺失42 kD左右的条带,即OmpE36。PCR扩增外膜蛋白基因OmpE36，Ea2880可见预期片段，DNA序列分析显示其与GenBank公布的产气肠杆菌标准株ATCC 13048的相似性为87%，氨基酸序列的相似性亦为87%；而Ea293未扩增出预期片段。结论产气肠杆菌临床株Ea293与Ea2880对厄他培南耐药的主要原因可能是外膜蛋白基因OmpE36缺失，同时Ea2880可能还有CTXM9组ESBLs参与