当归咖啡酸-O-甲基转移酶在大肠杆菌中的表达及组织表达分析

目的 研究当归咖啡酸-O-甲基转移酶（AsCOMT）在大肠杆菌（E.coli）BL21（DE3）中的表达，以及AsCOMT基因在当归抽苔植株和紫外线（UV）-B辐射胁迫下不同组织中的表达。方法 基于前期克隆的AsCOMT基因全长cDNA序列，利用双酶切技术构建pGEX-4T-3-AsCOMT原核表达载体，将其转化至E.coli BL21（DE3）中，优化重组蛋白诱导表达条件，通过聚丙烯酰胺凝胶制备试剂盒（SDS-PAGE）电泳检测；并利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析AsCOMT在当归抽苔植株和UV-B辐射胁迫下不同组织中的表达模式。结果 异源表达得到重组蛋白分子量为40 KDa，大小与预测分子量一致，AsCOMT蛋白主要以包涵体形式存在。qRT-PCR分析显示，抽苔当归茎中COMT的表达量显著高于其他组织（P<0.05）；UV-B辐射胁迫下，茎和叶中AsCOMT基因的表达水平差异有统计学意义（P<0.05），即随UV-B辐射增强，AsCOMT基因的表达量在茎和叶中呈先增加后减少的趋势，而在根中无明显变化。结论 AsCOMT在不同组织和处理下表达水平存在差异，且在E.coli中成功表达，为后期深入研究当归阿魏酸生物合成调控研究奠定了基础