白扁豆多糖对神经细胞缺氧性凋亡的保护机制

目的：模拟体内环境，研究白扁豆多糖（dolichos bean seed polysaccharide，DBSP）对胎鼠大脑 皮层神经细胞缺氧性凋亡的保护机制。方法：原代培养胎鼠大脑皮层神经细胞；建立缺氧/复氧（anoxia/ reoxygenation，A/R）损伤模型；实验分4 组：对照组、A/R组、白扁豆多糖预处理组（DBSP＋A/R组）、阻断剂组 （LY294002＋DBSP＋A/R组）；用比色法检测细胞活性与乳酸脱氢酶的释放水平；流式细胞仪分析测定Ca2＋ 相对浓度、活性氧、线粒体膜电位和细胞凋亡的变化；Western blot法检测总蛋白激酶B（total protein kinase B， T-Akt）和磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B，p-Akt）蛋白表达。结果：从细胞活性来看，A/R组比 对照组明显降低（P＜0.01），表明A/R对神经细胞产生了损伤。同时，与A/R组相比，DBSP＋A/R组细胞活性显著 上升、细胞凋亡明显减少（P＜0.01），乳酸脱氢酶的释放水平下降，表明DBSP对受A/R损伤的神经细胞产生保护 作用，进一步结果显示，与A/R组相比，DBSP＋A/R组中Ca2＋相对浓度和活性氧生成显著降低、显著增加线粒体膜 电位和p-Akt蛋白表达（P＜0.01）。而与DBSP＋A/R组相比，LY294002＋DBSP＋A/R组中p-Akt蛋白表达显著减少 （P＜0.01），同时细胞活性与线粒体膜电位下降，且LDH的释放水平、Ca2＋相对浓度、活性氧、细胞凋亡明显增加 （P＜0.05），表明DBSP对神经细胞的保护作用受到PI3K-Akt信号通路抑制剂LY294002的抑制作用而被削弱。结 论：DBSP可通过PI3K-Akt信号转导通路抑制神经细胞的缺氧性凋亡