双齿围沙蚕抗凝血肽的制备及其抗血栓作用

目的：探讨双齿围沙蚕抗凝血肽（anticoagulant peptides from Perinereis aibuhitensis，PAAP）的制备及其 抗血栓作用。方法：以抗凝活力为检测指标，筛选最佳酶对沙蚕进行酶解。酶解产物经超滤、阴离子交换层析、 凝胶过滤层析和反相高效液相色谱法分离纯化，得到具有最强抗凝活力的沙蚕寡肽，将此肽命名为PAAP并测定 其急性毒性作用。采用角叉菜胶所致的小鼠尾部血栓形成实验、三氯化铁所致的大鼠动脉血栓形成实验及二磷 酸腺苷（adenonisine disphosphate，ADP）诱导的血小板聚集实验，研究PAAP的抗血栓作用。结果：选取碱性蛋 白酶作为最佳酶对沙蚕进行酶解，经过分离纯化后得到一条氨基酸序列：脯氨酸-缬氨酸-谷氨酸-精氨酸-赖氨酸 （Pro-Val-Glu-Arg-Lys）。经测定，该寡肽的体外抗凝活力可达（1 320.0±20.3）U/g。PAAP的最大耐受量为 11.0 g/（kg·d）且未出现小鼠异常及死亡现象，体内实验表明PAAP对小鼠尾部血栓的形成、大鼠动脉血栓的形成 及ADP诱导的血小板聚集均有明显抑制作用。结论：从双齿围沙蚕中提取出的抗凝肽PAAP具有抗血栓作用