鱿鱼肝脏蛋白酶的鉴定及组织蛋白酶L的分离纯化

鱿鱼肝脏含有丰富的蛋白酶，为利用其内源蛋白酶进行可控的酶解，本研究以鲤鱼肌原纤维蛋白为底物对鱿鱼肝脏内源蛋白酶的种类和性质进行了研究。反应体系中添加E-64、1,10-菲啰啉和苯甲基 磺酰氟（phenylmethylsulfonyl fluoride，PMSF）后，肌球蛋白重链（myosin heavy chain，MHC）的降解得到了显著抑制，确定了鱿鱼肝脏含有金属类、半胱氨酸类、丝氨酸类3?类蛋白酶。半胱氨酸类蛋白酶热稳定性最好，在50?℃以上仍然具有较大活性，可将肌原纤维蛋白酶解成小分子质量的降解产物。利用特异性底物对半胱氨酸蛋白酶种类进行鉴定发现，该酶只酶解Z-Phe-Arg-MCA，添加亮抑酶肽后相对酶活性为0%，添加E-64相对酶活性仅存0.6%，初步确定鱿鱼肝脏中的半胱氨酸蛋白酶主要为组织蛋白酶L。最后，通过硫酸铵沉淀、离子交换层析、凝胶过滤对组织蛋白酶L进行分离纯化，在电泳上得到了分子质量约为25?kD单一条带