直接竞争化学发光酶免疫法检测呋喃妥因代谢物

建立检测动物组织中呋喃妥因代谢物的直接竞争化学发光酶免疫法。采用棋盘法确定抗体和酶标抗原的最佳稀释度，通过单因素试验优化包被条件、封闭液种类和竞争反应时间，建立直接竞争抑制曲线，并对方法的灵敏度、特异性、准确度和精密度进行方法学评价。结果表明，经优化，最佳反应条件为抗体稀释度1∶4 000，酶标抗原稀释度1∶80，包被条件为37 ℃ 2 h后4 ℃过夜，封闭液为1%牛血清白蛋白，竞争反应1 h。该方法的线性检测范围为0.030～10.595 ng/mL，IC50为0.559 ng/mL；加标回收率为84.9%～103.4%，批内变异系数为3.4%～7.8%，批间变异系数为4.7%～11.8%；除与呋喃妥因原药交叉反应率为36.2%，与其他结构类似物及衍生化试剂交叉反应率均小于0.1%。该方法灵敏、准确，可用于动物组织中呋喃妥因代谢物的快速筛查