云南莴笋尖酪氨酸酶分离纯化及酶学性质

为获得更多成本廉价且易得的酪氨酸酶来源，为云南莴笋尖酪氨酸酶抑制剂的研究提供参考，选取云南莴笋尖为实验材料，通过匀浆、缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析等方法纯化，获得电泳纯的酪氨酸酶，并对纯化后的酪氨酸酶进行部分酶学性质研究。结果表明，云南莴笋尖中酪氨酸酶的比活力为20.62 U/mg，分子质量约为995.40 kD，亚基分子质量约为65.23 kD。最适反应温度和最适反应pH值分别为60 ℃和8.0，在pH 6.0～8.0及20～40 ℃范围内较稳定。最适条件下，以左旋多巴为底物的Km值为1.567 mmol/L，vmax为0.037 6 μmol/（min·L）。乙醇、异丙醇、正丁醇对该酶活性有不同程度的抑制作用；甲醇、Co2＋、Mn2＋、Pb2＋、Ag＋、Cd2＋、Ba2＋、Ca2＋对该酶活性有不同程度的激活作用，Co2＋、Mn2＋对该酶具有显著的激活作用，低浓度的Zn2＋、Cu2＋、草酸、抗坏血酸对该酶有激活作用，高浓度时有抑制作用。尿素、EDTA、Li＋、K＋、Mg2＋对该酶活性影响较小