纳豆激酶基因工程菌的构建及酶活力分析

纳豆激酶由纳豆芽孢杆菌（Bacillus subtilis natto）的aprN基因编码，在体内外具有很强的溶解纤维蛋白活性。利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）技术扩增B. subtilis natto的aprN基因，并依据B. subtilis的密码子偏好性优化了起始30 个氨基酸的密码子，构建了重组表达质粒pHT01-aprN。经限制性酶酶切、PCR扩增和测序验证了其编码的正确性。通过电击法将含有强启动子的pHT01-aprN导入B. subtilis，利用氯霉素抗性筛选获得B.s 168/pHT01-aprN工程菌。经IPTG诱导表达，摇瓶发酵培养最高酶活力为（289.00±3.42） U/mL，是野生菌的3.9 倍，酶活力表达稳定性良好