双酶法制备马鹿茸降血糖肽工艺优化及其对α-葡萄糖苷酶的抑制效果

为探索制备马鹿茸降血糖肽的最佳工艺条件，以α-葡萄糖苷酶抑制率为指标，从碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶中筛选出两种酶，根据其体外降血糖效果确定酶的作用顺序，再以水解度、α-葡萄糖苷酶抑制率和蛋白质回收率为指标进行单因素试验和正交试验，优化降血糖肽制备工艺条件。结果表明：碱性蛋白酶和风味蛋白酶比中性蛋白酶和胰蛋白酶更适合用于制备马鹿茸降血糖肽。采用碱性蛋白酶-风味蛋白酶顺序对马鹿茸进行水解，所得酶解产物的α-葡萄糖苷酶抑制率、蛋白质回收率和水解度较高，分别为21.11%、39.12%、19.88%。通过单因素试验和正交试验确定双酶酶解最佳工艺条件为先用碱性蛋白酶在pH 8.0、60 ℃、底物质量分数12%、加酶量5 000 U/g条件下酶解3 h，再用风味蛋白酶于pH 6.5、45 ℃、底物质量分数5%、加酶量6 000 U/g条件下酶解1 h。双酶分步水解终产物的α-葡萄糖苷酶抑制率受质量浓度的影响，当质量浓度为3 mg/mL时，α-葡萄糖苷酶抑制率可达94.09%，IC50值为1.82 mg/mL。碱性蛋白酶-风味蛋白酶双酶分步水解马鹿茸可获得高α-葡萄糖苷酶抑制率的降血糖肽