β2肾上腺素受体基因在Sf9细胞中的表达及纯化

通过密码子优化、昆虫杆状病毒表达系统（Bac-to-Bac）构建、表达条件筛选及镍柱亲和层析，研究β2肾上腺素受体（β2 adrenergic receptor，β2AR）基因（β2AR）在昆虫细胞Sf9中的高效表达及纯化策略。方法：人工合成改造后的β2AR基因，将其克隆至转移载体pFastBac1中，构建重组杆状病毒表达质粒pFastBac1-β2AR’，转染昆虫细胞Sf9，优化表达条件，采用镍离子亲和层析法纯化重组蛋白并进行活性鉴定。结果：适宜的表达条件为感染细胞使用的感染复数5、感染后表达时间48?h，Western blot分析显示在47?kD左右处出现清晰的特异性条带，与预期结果一致。纯化的受体蛋白纯度大于90%，活性鉴定结果显示该受体蛋白可特异性吸附盐酸克伦特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺3?种β激动剂的酶标记物，OD值分别为0.983、0.947和0.912。结论：本研究实现了β2AR受体在Sf9细胞中的表达，且纯化后的受体蛋白保持了较好的β激动剂亲和活性，为利用β2AR受体开展β激动剂多残留快速检测技术提供了依据