金黄色葡萄球菌新型肠毒素SEK原核表达、纯化及溶液构象分析

金黄色葡萄球菌K型肠毒素（Staphylococcus aureus enterotoxin K，SEK）由金黄色葡萄球菌肠毒素基因簇编码，流行病学显示，编码SEK蛋白的sek基因在食品源金黄色葡萄球菌菌株中具有较高的检出率，说明SEK也可能是一种重要的食品中毒潜在致病因子。本研究将截去N端信号肽的SEK蛋白编码基因与原核表达载体pET-28a（＋）连接，构建重组表达质粒pET-28a（＋）-ΔNspsek；通过对sek基因在不同原核表达宿主菌中的表达及表达条件优化分析，确立SEK蛋白的最优表达条件；利用镍亲合层析纯化含组氨酸（His）标签的SEK融合蛋白，将凝血酶切除His标签后的SEK蛋白进行聚合状态及热稳定分析、荧光发射谱和圆二色谱分析。结果表明，重组蛋白SEK表达成功，热处理导致蛋白部分降解；荧光光谱揭示SEK蛋白在278?nm和295?nm波长处具有相同的最大色氨酸发射峰；344?nm波长处表明SEK蛋白处于紧密折叠的天然状态；圆二色谱分析表明，ΔNspSEK重组蛋白富含β-折叠（23.6%）、β-转角（28%）以及α-螺旋（29.1%）等二级结构。为深入研究SEK蛋白的结构与功能提供基础，也对改进食品加工工艺和提高食品安全具有指导意义