海洋氧化节杆菌KQ11右旋糖苷酶催化位点关键氨基酸

通过同源比对，对来自海洋氧化节杆菌（Arthrobacter oxydans KQ11）的右旋糖苷酶（记作AoDex）催化域及关键氨基酸进行预测，运用定点突变将AoDex催化域418-QTDGIELYKGSTMKNTFFNANDD-440中的5 个氨基酸突变为甘氨酸，获得5 种突变型右旋糖苷酶原核表达载体：pColdIII-KQN-Q418G、pColdIII-KQN-D420G、pColdIII-KQN-E423G、pColdIII-KQN-D439G、pColdIII-KQN-D440G，表达产物分别记为Q418GDex、D420GDex、E423GDex、D439GDex、D440GDex。经过发酵表达，Q418GDex、D420GDex、E423GDex、D439GDex几乎没有酶活力。D440GDex酶活力与AoDex一致；所不同的是，D440GDex在25～40 ℃时的酶活力提高了2～3 倍，最适pH值也从AoDex的5.5变为6.5。数据表明，Q418、D420、E423、D439四个氨基酸残基是AoDex催化域中的关键氨基酸。D440突变为甘氨酸对该酶的性质有较大影响，也表明其不是催化域中的广义碱。本研究表明AoDex的催化机制与糖苷酶49家族是一致的，为AoDex的功能改造提供了理论支持