花生过敏原Ara h 1蛋白的原核表达及致敏性分析

从花生中提取总RNA，用反转录聚合酶链式反应得到花生过敏原Ara h 1基因，构建pET-28a-Ara h 1表达载体，转入Rosetta（DE3）宿主表达菌中诱导产物表达，用镍离子亲和层析法纯化得到目的蛋白。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示目的蛋白分子质量约为75 kDa，与预计相符；经质谱鉴定为Ara h 1蛋白。用BALB/c小鼠模型评价重组Ara h 1蛋白的致敏性结果显示，重组Ara h 1蛋白致敏小鼠血清中特异性抗体、Th2型细胞因子、组胺含量升高，空肠和肺组织发生病变，表明重组Ara h 1蛋白可以导致小鼠发生Th2型过敏反应，且有与天然Ara h 1蛋白相似的致敏性。同时RBL细胞模型结果显示重组Ara h 1蛋白还可导致RBL细胞脱颗粒，释放β-己糖苷酶，进一步表明重组Ara h 1蛋白具有致敏性