草甘膦人工抗原的制备及兔源多抗的ELISA鉴定

采用1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺（1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimidehydrochloride，EDC）法和戊二醛（glutaraldehyde，GA）法，合成了草甘膦（N-(phosphonomethyl) glycine，PMG）人工抗原，通过免疫制备高敏感性、特异性的兔PMG多克隆抗血清并进行鉴定。将PMG分别与牛血清白蛋白（bovine serum albumin，BSA）和鸡卵清白蛋白（ovalbumin，OVA）偶联，合成免疫抗原PMG-BSA和包被抗原PMG-OVA。经紫外扫描、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定后，免疫新西兰大白兔，制备多抗。利用间接酶联免疫吸附（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）方法测定多抗效价，间接竞争ELISA方法测定血清的敏感性和特异性。结果表明，免疫的3 只兔血清效价均达1∶104以上，2号兔多抗效果最好，半数抑制浓度（IC50）为30.9 μg/mL，且具备良好的特异性。本实验成功合成了PMG人工抗原，并制得了敏感性高、特异性好的兔多抗，为PMG的免疫学快速检测方法的提供参考