利用坛紫菜藻红蛋白制备脯氨酰内肽酶抑制肽

以坛紫菜（Porphyra haitanensis）为原料，通过硫酸铵盐析和DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析等方法分离纯化得到一种高纯度藻红蛋白（R-phycoerythrin，R-PE）（A565 nm/A280 nm=5.4）。利用胃、肠液消化酶对R-PE进行酶解制备脯氨酰内肽酶（prolyl endopeptidase，PEP）抑制肽。酶解条件为：1）胃蛋白酶与R-PE比例0.5%（m/m），酶解时间30 min，pH 1.2，温度37 ℃；2）胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶质量比为1∶1的混合酶，其与R-PE比例0.25%（m/m），酶解时间30 min，pH 7.5，温度37 ℃。Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析发现，经两步酶解，R-PE被完全降解。采用凝胶过滤色谱法测得R-PE水解液中分子质量在3 kDa以下的小肽含量为86.06%。R-PE水解液对PEP抑制水平IC50为136.35 μg/mL。酶抑制动力学研究发现，R-PE水解液对PEP表现为可逆的非竞争性抑制作用，抑制常数Ki为14 μg/mL。本研究利用坛紫菜R-PE制备活性高的PEP抑制肽，将为坛紫菜深加工及高值化利用提供一定的理论参考