茶黄素双没食子酸酯的酶法合成条件优化与纯化

利用皇冠梨多酚氧化酶催化表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG）和表儿茶素没食子酸酯（epicatechin gallate，ECG）合成茶黄素双没食子酸酯（theaflavin-3,3’-O-digallate，TFDG），首先单因素试验确定了酶促反应的底物EGCG/ECG物质的量比3∶1、pH?4.0、反应温度35?℃，在此基础上采用Box-Behnken试验设计法进行3因素3水平响应面优化试验，确定了TFDG最优酶促反应条件为底物EGCG/ECG物质的量比3.1∶1、pH?4.1、反应温度37?℃；在最优反应条件下进行TFDG的合成，并利用AB-8层析柱结合高速逆流色谱技术分离纯化反应液，结果表明TFDG的得率和纯度分别达到85.14%和97%