蓝圆鲹骨骼肌内源性脯氨酸内肽酶抑制剂的纯化及其抑制机理

对蓝圆鲹（Decapterus maruadsi）骨骼肌采用热处理、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose弱阴离子交换柱层析、Sephacryl S-200 HR凝胶过滤层析和HiTrap Q HP强阴离子交换柱层析相结合方法，分离、纯化出一种内源性脯氨酸内肽酶抑制剂（prolyl endopeptidase inhibitor，PEPI）。研究了PEPI对脯氨酸内肽酶（prolyl endopeptidase，PEP）活性的影响及抑制机理。Tricine-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳分析表明纯化的PEPI分子质量约为10 kDa，具有较强的热稳定性和酸碱耐受性，其为丝氨酸蛋白酶类PEP的专一性、可逆竞争型抑制剂，抑制常数Ki为0.34 μmol/L。PEPI与PEP形成复合物后，α-螺旋、无规卷曲比例增加，β-折叠比例减少，PEP活性中心构象的改变是酶活力被抑制的主要原因