枯草芽孢杆菌纤维素酶基因整合载体的构建

目的：以枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）为宿主，构建纤维素酶基因整合表达载体，获得能够表达纤 维素酶并且降解纤维素的工程菌。方法：通过聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）从B. subtilis LN 基因组中克隆同源片段M1、M2基因片段，以质粒pGEM-T为载体，将同源片段M1、M2、启动子P43和葡萄糖苷 酶基因CelKg连接在一起构建整合载体pGEM-Kmpgmt，并采用双交换同源重组的方式将其转化进入B. subtilis LN 基因组中。结果：通过PCR和双酶切验证整合载体构建完成，并成功整合到野生型B. subtilis LN中，获得重组菌 B. subtilis Kpg。刚果红染色结果显示重组菌对羧甲基纤维素钠有降解作用。改良培养基37 ℃条件下摇瓶培养，重组菌 B. subtilis Kpg生长至18 h时上清液中纤维素酶活力比野生型B. subtilis LN提高了115%