鱼鳔类肝素的分离纯化与结构鉴定

本研究以鱼鳔为原料，采用酶法提取类肝素化合物，采用阴离子交换树脂吸附、氯化钠溶液梯度洗脱和醇沉法进行分离纯化；并进一步分析其结构特征，分别通过紫外光谱法、高效凝胶色谱分析其纯度和分子质量，醋酸纤维素薄膜电泳初步鉴定其种类，柱前衍生-高效液相色谱法分析其单糖组成，傅里叶变换红外光谱分析其官能团结构，酶裂解-质谱/质谱法测定其二糖组成，核磁共振鉴定其一级结构。结果显示：鱼鳔类肝素的得率为（2.21±0.03） mg/g，纯度较高，类肝素含量为（85.79±0.63）%，分子质量约为84 000 u；单糖组成为葡萄糖醛酸（glucuronic acid，GlcA）和N-乙酰基半乳糖胺（N-acetylgalactosamine，GalNAc），同时含有少量的艾杜糖醛酸、半乳糖；电泳位移与硫酸软骨素相似，且具有羧基、乙酰氨基、硫酸基轴向伸缩等特征吸收峰。最终确定鱼鳔类肝素主要组成是由重复的二糖单位[→4GlcUA β1→3GalNAc(4S)β1→]构成的硫酸软骨素A