N-糖基化修饰对极端嗜热酸性α-淀粉酶ApkA酶学性质的影响

为探索N-糖基化修饰对极端嗜热酸性α-淀粉酶ApkA酶学性质的影响，同时为构建酵母工程菌奠定基础，将ApkA缺失信号肽突变体ApkAds及含有2 个潜在N-糖基化修饰位点的突变体ApkAdsD182N/G373S在毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115中进行表达。ApkAds和ApkAdsD182N/G373S在Pichia pastoris GS115中大量表达并分泌到胞外，ApkAds的表观分子质量约为45 kD，ApkAdsD182N/G373S的表观分子质量约为55 kD。酶学性质分析表明，与ApkAds相比，ApkAdsD182N/G373S的酶学性质发生了一定的变化。其最适反应pH值由6.5降低至5.5～6.0，酸性条件下稳定性增强；最适反应温度由90 ℃提高至100 ℃；于90 ℃的半衰期由5 h增加至5.5 h，于100 ℃保温10 min后的相对酶活力由32.03%增加至49.04%。结果表明N-糖基化修饰可适当提高ApkA的酸性条件下酶活力和稳定性、最适反应温度、热稳定性。突变体ApkAdsD182N/G373S的酶学性质使其适于淀粉液化工艺的应用