瘤胃中干酪乳杆菌的亚油酸异构酶基因的克隆与表达

以从黄牛瘤胃中分离到的一株具有将亚油酸转化为c9,t11-共轭亚油酸（conjugated linoleic acid，CLA）的干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）Fx为出发菌株，提取其基因组DNA，聚合酶链式反应（polymerase chainreaction，PCR）扩增得到1 700 bp大小的亚油酸异构酶（linoleic acid isomerase，LAI）基因片段，将该基因片段纯化后进行TA克隆，得到重组质粒pUCm-T-LAI，将重组质粒pUCm-T-LAI和表达质粒pET-DsbA同时进行双酶切，连接得到重组表达载体pET-DsbA-LAI，经PCR鉴定和酶切后，将重组表达载体转化到大肠杆菌BL21中，得到具有LAI活性的重组菌株，能将亚油酸转化为c9,t11-CLA，表明从Lactobacillus casei Fx成功克隆LAI，该研究将有助于深入了解不同瘤胃细菌特异性合成不同CLA异构体的LAI基因差异