免疫磁珠分离与实时定量PCR技术联合检测水中轮状病毒的研究

建立了一种免疫磁珠分离技术联合实时定量PCR快速定量检测水中轮状病毒的方法.通过制备能够分离水中轮状病毒的特异免疫磁珠，优化分离条件，建立了免疫磁珠分离前处理方法，并与逆转录、实时定量PCR结合，成功用于水中轮状病毒的检测.研究发现，在1 mL水样中加入10 μL轮状病毒免疫磁珠、0.25 μL Tween 20、孵育2 h可达到较好的分离效果；免疫磁珠可用于3%牛肉浸膏等常用病毒洗脱液中的轮状病毒的分离，表明该分离技术能与已有的病毒浓集方法良好地整合.免疫磁珠分离技术与实时定量PCR联合用于检测水中轮状病毒，全过程需时约5 h，检测限为1×104　copies/mL(相当于3～4　PFU/mＬ)，检测结果与细胞病变试验检测结果有良好的线性相关关系（R2=0.981 6），表明其能较好地表征水样的病毒感染风险.对接种已知量的轮状病毒的污水处理厂二级出水、再生水、地表水、自来水等水样的实验表明，该法可用于各种水样中轮状病毒的检测