多聚磷酸盐激酶基因在污水生物除磷中的功能

为验证多聚磷酸盐激酶基因（ppk）在污水生物除磷中的功能.采用Red敲除系统，以pKD4质粒为模板，设计同源短臂，扩增外源线性DNA片段，将外源线性DNA片段电转化整合入已导入pKD46的大肠杆菌ATCC25922野生型菌株.获得重组菌E.coli/ppk- Kan+.将pCP20导入大肠杆菌E.coli/ppk- Kan+以消除卡那霉素抗性基因，通过负抗性筛选及正反向引物验证，构建无抗生素抗性的ppk基因缺失工程菌株E.coli/ppk- Kan-.比较工程菌株和野生型菌株的生长特性，并比较两者在缺磷诱导/富磷及多次厌氧/好氧诱导条件下的除磷性能.结果表明采用Red重组系统，通过无痕敲除，成功构建了大肠杆菌ppk基因缺失菌株E.coli/ppk- Kan-.敲除后的工程菌株和野生型菌株生长整体没有差异，但是4 h前对数期工程菌株生长快于野生型菌株，8 h后稳定期工程菌株生长慢于野生型菌株，表明ppk影响菌体的生长；缺磷诱导/富磷条件下，工程菌株并未表现出因ppk缺失而影响其除磷能力；经过5次厌氧/好氧诱导，两菌菌体含磷量保持在1%~2%，没有因诱导次数的增加而表现出菌体含磷量增加的趋势，也未发现厌氧有PHB好氧有聚磷颗粒生成，表明ppk基因的缺失并没有引起菌体除磷能力的下降.ppk并未表现出明显的与污水生物除磷相关的功能