聚磷激酶基因在假单胞菌中的整合和表达

为了构建高效除磷的微生物，将来源于大肠杆菌的聚磷激酶基因（ppk）插入广宿主载体pBBR1MCS-2多克隆位点区，得到质粒pBBR1MCS-2-ppk.以该质粒为模板，通过PCR扩增出携带有载体启动子和终止子序列的ppk基因，插入自杀型质粒pUTmini-Tn5中得到重组质粒pUTmini-Tn5-ppk.pUTmini-Tn5-ppk经三亲接合作用进入Pseudomonas putida KT2440，同时mini-Tn5通过转座作用将ppk整合到宿主菌株的染色体DNA中，获得基因工程菌Pseudomonas putida KT2440-PPK，用于表达ppk.RT-PCR结果显示，ppk基因在KT2440-PPK中得到较高量的表达，而在原始菌株KT2440中表达微弱.人工模拟污水实验结果表明，接种1 h时KT2440-PPK中聚磷含量达到最大，为3.05 mg/g，约是对照菌株KT2440的15倍.测定模拟污水中磷酸盐的含量表明，KT2440-PPK可以去除该模拟污水中90%以上的磷酸盐