肿瘤微环境双重响应性的智能型蛋白毒素给药系统的构建和表征

目的 利用蛋白重组技术和PEG定点修饰技术，制备具有肿瘤微环境双重响应性的智能型蛋白毒素给药系统。方法 利用基因重组技术，在天花粉蛋白(trichosanthin，TCS)的C端引入天冬酰胺内肽酶(legumain)的底物天冬酰胺肽段和半胱氨酸残基，将所构建的突变体转化到大肠杆菌中表达目的蛋白并纯化。进一步将重组蛋白末端的半胱氨酸与具有巯基反应性的mPEG-Hz-Mal偶联合成TCS-Asn10-Hz-PEG，采用弱阳离子交换柱纯化TCS-Asn10-Hz-PEG，并在体外考察了TCS-Asn10-Hz-PEG的酸敏感性和酶敏感性。结果 成功制备、分离和纯化得到了TCS-Asn10-Cys，完成了mPEG-Hz-Mal与TCS-Asn10-Cys的定点偶联，得到智能型蛋白毒素给药系统TCS-Asn10-Hz-PEG。TCS-Asn10-Hz-PEG在体外pH 5.6的介质中和天冬酰胺内肽酶的作用下，能够水解或酶解释放出TCS，具有酸敏感特性和酶敏感特性。结论 本实验设计的蛋白毒素给药系统，具有酸敏感和酶敏感双重响应特性