基于NF-κB信号通路的高通量药物筛选细胞炎症模型的建立

目的 建立均相时间分辨荧光（homogeneous time-resolved fluorescence，HTRF）测定炎症细胞模型中NF-κB的方法，为高通量筛选呼吸道炎症药物提供实验依据。方法 采用HTRF检测细胞中Total-NF-κB及Phospho-NF-κB比率来确定NF-κB磷酸化程度。观察不同细胞密度（每孔5，25，50，100，150 k）、不同刺激因子（TNF-α、LPS）、不同作用时间（10，30，60 min）等条件对支气管平滑肌细胞（BSMC）、支气管上皮细胞（HBE）NF-κB磷酸化的影响，建立炎症细胞模型及HTRF测定NF-κB的方法。结果 采用HBE细胞，细胞密度为每孔10 k，刺激因子TNF-α（10 ng?mL-1）刺激细胞，刺激10 min建立炎症细胞模型，可使细胞中NF-κB磷酸化水平达到52.6%，与正常对照组（14.2%）相比，有明显升高。结论 成功建立了快速、特异性高、操作简便的HTRF测定细胞炎症模型中NF-κB磷酸化程度的方法，为气道炎症药物筛选研究提供了依据