大鼠肝微粒体中CYP2C9酶的活性及动力学研究

目的 以双氯芬酸为探针药，建立HPLC测定大鼠肝微粒体CYP2C9酶活性的方法，并对其进行动力学考察。方法 采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱；流动相为乙腈-水-0.1%三氟乙酸，梯度洗脱；流速为1 mL?min-1；柱温30 ℃；检测波长为278 nm。大鼠肝微粒体加入双氯芬酸钠孵育30 min后，用盐酸和乙酸乙酯终止反应，加入内标地西泮，涡旋后高速离心，取上层有机相吹干复溶进样检测；以Lineweaver-Burk作图计算Km和Vmax。结果 双氯芬酸、4-羟基双氯芬酸和内标分离良好且无内源性干扰。4-羟基双氯芬酸浓度在0.05~10 μmol?L-1内线性关系良好(r=0.999 8)，定量下限为0.05 μmol?L-1；日内、日间精密度均<10%，回收率>75%。动力学考察表明选择盐酸和乙酸乙酯作为终止试剂效果良好，测得大鼠肝微粒体中双氯芬酸羟化反应的Km为26.87 μmol?L-1，Vmax为2.359 nmol?min-1?mg-1 pro。结论 该方法稳定，结果能准确反映CYP2C9酶的活性，可用于相关动力学研究