聚乙二醇化海葵神经毒素的修饰反应条件及药效研究

目的 优化聚乙二醇(PEG)修饰海葵神经毒素rhk2a(rhk2a)的反应条件，并考察修饰后产物PEG化海葵神经毒素rhk2a(mPEG-rhk2a)的药效性质。方法 本研究选用分子量为5 000的PEG丙醛(mPEG-ALD)对rhk2a的N-末端氨基进行修饰；通过单因素考察和正交试验筛选出最佳的修饰反应条件。同时，采用HPLC检测修饰后产物中mPEG-rhk2a的纯度，并通过建立急性心力衰竭豚鼠模型，考察mPEG-rhk2a对豚鼠的强心作用。结果 优选出的mPEG-ALD对rhk2a的N-末端氨基的修饰反应条件是：当pH为5.0、rhk2a与mPEG反应摩尔比1∶20、还原剂氰基硼氢化钠为30 μL、反应时间为12 h时，所得修饰产物mPEG-rhk2a的得率较高。采用SP-650S强阳离子交换层析法对修饰反应后产物进行分离，纯化后产物中mPEG-rhk2a占83.287%。对于心衰豚鼠，给mPEG-rhk2a溶液后，左心室收缩压、左心室压力最大下降速率明显增加，20 min后呈持续的平稳状态。其强心作用虽然不如rhk2a强，但波动起伏较小，而且强心效果明显高于乙酰毛花苷注射液。结论 优选出mPEG修饰rhk2a反应的适宜条件，所得的mPEG-rhk2a强心作用较为理想