正交设计优化北重楼ISSR-PCR体系

摘要： 利用正交试验设计L9(34)的方法，最终建立了北重楼ISSR-PCR的优化反应体系，即20 μL反应体系中包含1×buffer，dNTP 175 μmol·L-1，Primer 0.8 μmol·L-1，Mg2+ 1.4 mmol·L-1，Taq酶2.5 U及模板DNA 80 ng。适宜的扩增程序为95℃预变性5 min；94℃变性40 sec，55℃退火45 sec，72℃延伸90 sec，40个循环；72℃延伸7 min，4℃保存。该优化体系的建立，将为北重楼及其近缘种的系统学和种质资源鉴定及遗传多样性的研究奠定基础