标记蛋白HPT的表达、纯化及免疫活性鉴定

摘要： 构建含有HPT的原核表达质粒，经诱导表达纯化后获得HPT抗体。从含有hpt的质粒pCambia1301上扩增目的基因，经SalⅠ和NotⅠ双酶切后与原核表达载体pET-28b（+）进行粘性末端连接，成功构建了pET-28b-hpt质粒，并转化到宿主细菌大肠杆菌Rosset(DE3)中进行蛋白表达。在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下,pET-28b-hpt原核表达载体在E.coli Rosset菌株中以包涵体的形式高效表达了HPT蛋白，并以纯化的目的蛋白为抗原免疫兔制备了多克隆抗体。利用本方法可以获得特异性强、灵敏度高的多克隆抗体