乌塌菜ISSR-PCR反应体系的建立及优化

摘要： 为获得乌塌菜ISSR-PCR的最佳反应体系，采用单因素浓度梯度试验和正交优化设计相结合的方法，研究了引物浓度、dNTP浓度、Mg2+浓度、Taq DNA聚合酶用量对PCR反应的影响。并在此基础上对退火温度和循环数进一步优化，最终确立了适合乌塌菜ISSRPCR反应的最佳体系和程序。即20 μL PCR反应体系含：30 ng模板DNA，0.50 μmol·L-1引物，0.25 mmol·L-1 dNTP，1 mmol·L-1 Mg2+，1.0 U Taq DNA聚合酶。PCR扩增程序为：94℃预变性3 min；94℃变性30 s，50℃退火1 min，72℃延伸90 s，35个循环；72℃延伸7 min，4℃保存。这一优化的ISSR-PCR反应体系的建立为今后利用ISSR技术对乌塌菜进行种质资源的分类鉴定奠定了基础