侵染浙贝母3种病毒CP基因的原核表达、抗血清制备及其病毒检测

摘要： 根据GenBank报道的浙贝母花叶病毒(Thunberg fritillary mosaic virus,TFMV)、浙贝母Y病毒(Fritillary virus Y,FVY)和百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)序列设计引物，扩增其CP基因。将CP基因插入表达载体pSBET，转化大肠杆菌BL21(DE3)Plys E菌株，IPTG诱导表达。经12% SDS-PAGE和5%~20%梯度SDS-PAGE两次纯化CP，分别免疫小鼠获得抗CP血清。采用Western blot分析确定抗体的特异性及其之间的血亲学关系；采用ELISA分析确定抗体是否能与天然病毒粒子结合。采用Western blot、间接ELISA法和Dot-ELISA 法检测侵染浙贝母的3种病毒。结果表明，制备的抗体对CP有高度特异性，相互之间无交叉反应，且能与天然病毒离子结合。制备的抗血清可以用于检测3种病毒，其中间接ELISA法和Dot-ELISA法检测效果较好