甘蔗黄叶病毒CP蛋白基因ihpRNA表达载体构建及烟草转化

摘要： 为提高甘蔗抗病性，本研究根据甘蔗黄叶病毒海南分离物ScYLV-CHN-HN1全基因组序列(GenBank no. HQ342888)，利用病毒CP蛋白介导的RNAi技术，针对病毒外壳蛋白CP，设计两对含有酶切位点的特异性引物，CPsf1/CPsr1和CPasf1/CPasr1，以构建好的pMD19-T/CP质粒为模板，pRNAi1017为中间载体，分别合成构建干扰载体的正反向片段pRNAi-CP-F-R，将CP正反向片段分别插入表达载体pCAMBIA2300的相应位置，构建含有发卡结构的RNAi载体p2300-CP-F-R，经过PstⅠ酶切鉴定，证明载体构建成功。通过农杆菌介导的方法，以干扰表达载体p2300-CP-F-R转化烟草，经过PCR检测，得到12株阳性转基因植株，Southern blot杂交和半定量RT-PCR对其检测，证明干扰片段已经整合烟草基因组中并进行了转录，该结果为RNAi介导抗病毒甘蔗育种研究奠定基础