烟草叶片愈伤组织形成过程中的细胞程序性死亡

摘要： 以烟草叶片在MS培养基上诱导的10个不同时期的愈伤组织为材料，通过荧光染色显微观察到细胞核在形态上发生了缩缢变形，DNA Ladder检测也出现了标志细胞程序性死亡特征的DNA片断，表明了愈伤组织形成过程中发生了细胞程序性死亡（programmed cell death, PCD），而在诱导的第六个时期（13 d）DNA的脱尾现象最为明显，表明这一时期是PCD发生较为活跃的时期。利用RT-PCR法在诱导的前九个时期，即诱导的第3、5、7、9、11、13、15、17、19 d的叶片的愈伤组织中均扩增出了细胞程序性死亡相关Beclin1基因的cDNA片段(678 bp)，Northen杂交结果显示，在诱导的第13 d，类Beclin1基因表达较强。通过酶联免疫法测定诱导前14 d叶片中内源激素ABA的含量变化，在诱导的第六时期ABA含量相对达到了峰值，结果表明：在烟草叶片愈伤组织诱导过程中伴随PCD的发生，在此过程中内源激素ABA与Beclin1基因起到了调节作用