水稻锌指蛋白OsRZ3基因克隆及融合蛋白的原核表达、纯化

摘要： 根据NCBI登录的水稻锌指蛋白基因(NO.AK062094,OsRZ3 gene)设计特异引物，通过RT-PCR克隆该基因cDNA全长序列，核苷酸测序并比对氨基酸同源性表明具有C2HC-锌指结构域、分析预测蛋白质分子量为34 kD和等电点为9.05；拟南芥原生质体亚细胞定位检测表明其在细胞核。构建pGEX6P-3::OsRZ3融合载体，电转化的大肠杆菌BL21(DE3)菌株经1 mmol·L-1 IPTG小量诱导表达，SDS-pAGEX蛋白电泳表明60 kD融合蛋白4 h最大；在LB液体培养中0.5 mmol·L-1 IPTG过夜大量诱导表达，通过GST吸附柱层析获得大量包涵体纯化蛋白，1L菌液可诱导纯化到浓度1.58 mg·mL-1包涵体融合蛋白。所构建的融合蛋白原核表达系统能有效表达pGEX6P-3::OsRZ3融合蛋白，0.5 mmol·L-1 IPTG大量诱导，通过GST柱吸附获得包涵体纯化蛋白，为作进一步的抗体制备和染色质免疫共沉淀等DNA结合的特性研究准备了基础