内源性神经营养因子促进冷冻保存大鼠坐骨神经异体移植后神经再生的作用

摘要： 目的 探讨内源性神经营养因子(ENTFs)对冷冻保存大鼠坐骨神经同种异体移植后神经再生的影响。 方法 15 mm雌性Sprague-Dawley大鼠坐骨神经置于DMEM溶液中，37 ℃、5% CO2分别体外预处理1 d、3 d、7 d、14 d和21 d (A组、B组、C组、D组和E组)，设置新鲜神经对照组(F组)。Western blotting检测神经的胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、神经生长因子(NGF)、Bcl-2、Bax、Caspase-3、主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅰ、MHC-Ⅱ蛋白表达。将上述6组神经置于冷冻保存液中液氮保存4周，Calcein-AM/Propidium Iodide染色、激光共聚焦显微镜观察保存后神经活细胞和死细胞情况。用上述冷冻保存4周的坐骨神经和新鲜坐骨神经(G组)，同种异体移植修复雌性Wistar大鼠坐骨神经10 mm缺损(A′组、B′组、C′组、D′组、E′组、F′组和G′组)，设置同系移植组(H′组)。移植术后1周，免疫荧光染色观察CD8+T细胞、巨噬细胞入侵移植物情况，ELISA法检测受者血清白细胞介素(IL)-2、干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平；移植术后20周，电生理检测肌肉复合动作电位(CMAP)和神经传导速度(NCV)，称重计算腓肠肌湿重比，神经丝(NF)200免疫荧光染色、甲苯胺蓝染色和透射电镜观察再生神经组织学。 结果 与F组相比，C组、D组和E组GDNF、NGF蛋白表达均增加( P < 0.05)；B~E组Bcl-2蛋白表达降低( P < 0.05)，Bax和Caspase-3蛋白表达均增加( P < 0.05)；A组~E组MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ蛋白表达均降低( P < 0.05)。坐骨神经冷冻保存4周后，与F组和G组相比，C组、D组和E组活细胞数量降低。同种异体移植术后1周，与F′组和G′组相比，C′组、D′组和E′组移植物CD8+T细胞、巨噬细胞减少，受者血清IL-2、TNF-α水平降低( P < 0.05)。移植术后20周，C′组、D′组和E′组CMAP、NCV、腓肠肌湿重比、再生有髓神经纤维数及髓鞘厚度均显著优于F′组和G′组( P < 0.05)，C′组、D′组和E′组移植神经NF200表达高于F′组和G′组。 结论 体外预处理大鼠坐骨神经能诱导ENTFs表达，高表达ENTFs的坐骨神经冷冻保存后异体移植能促进受者神经再生和功能恢复