尼罗罗非鱼MyD88基因的表达及多克隆抗体制备

为体外表达尼罗罗非鱼髓样分化因子（MyD88）蛋白并制备抗该蛋白的多克隆抗体，采用无缝克隆技术将尼罗罗非鱼MyD88基因转入pET-B2m原核表达载体，并转入大肠杆菌B21中诱导表达，将表达的MyD88蛋白经纯化后免疫大耳兔制备多克隆抗体，采用Western blot和ELISA检测抗体的特异性和效价。试验结果表明，本研究成功构建了pET-B2m-MyD88原核表达载体，诱导表达获得了48.9 ku的重组蛋白，免疫大耳兔获得效价为1∶2 048 000的抗尼罗罗非鱼MyD88多克隆抗血清。Western blot检测结果显示，该抗体能够特异性的识别原核表达的MyD88蛋白。原核表达体系的建立及多克隆抗体的制备为进一步研究MyD88蛋白在尼罗罗非鱼先天性免疫中的功能奠定了基础