4种海水鱼线粒体DNA大片段的PCR-RFLP分析

用蛋白酶k酚氯抽提法从圆斑星鲽、高眼鲽、大菱鲆和真鲷4种海水鱼的肌肉组织中提取基因组DNA, 根据金枪鱼、牙鲆及相关鱼类的线粒体DNA(mtDNA)序列保守片断设计出扩增引物, 扩增从16SrRNA到ND4之间约9400bp的mtDNA长片段.用10种限制性内切酶(Hinf I, Hind III, EcoR V, EcoT22 I, Mun I, EcoT14 I, Apa I, Bln I, Ava II, Dra I)对扩增得到的mtDNA长片段进行限制性酶切和分析, 其中8种酶有酶切位点.利用Nei-Li的片断法计算出单倍型的片断共享度,根据片断共享度计算出4种鱼之间的遗传距离,用Mega3.1软件构建NJ系统关系树,同时探讨利用线粒体大片断PCR-RFLP方法进行鱼类系统发生研究的特点