甘肃金鳟RAPD反应体系构建及优化

以甘肃金鳟尾鳍为试验材料,提取基因组DNA.对影响甘肃金鳟RAPD扩增的重要参数进行了优化试验,包括模板DNA浓度、dNTP浓度、引物浓度、Taq酶、变性时间、退火温度等,建立了甘肃金鳟RAPD反应的最适体系.即在25 μl反应体系中:模板DNA用量为4.0 ng/μl;Mg2+浓度为2.5mmoL/L;dNTP浓度为0.5 mmol/L;引物浓度为0.5 μmol/L;Taq酶用量为1 U;扩增程序:94℃预变性4 min,94 ℃变性45 s,36℃退火50 s,72℃延伸1 min,共35个循环,最后延伸10 min