黄鳝血清转铁蛋白多克隆抗体的制备及检测

为实现黄鳝血清转铁蛋白基因的原核表达并制备其多克隆抗体，利用基因特异性引物从黄鳝肝脏cDNA中扩增黄鳝转铁蛋白的C端序列，亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)中，构建pET/Tf-C重组表达载体|转化大肠杆菌BL21(DE3)后进行IPTG诱导。利用Ni离子亲和层析技术纯化Tf-C蛋白，并免疫新西兰兔制备多克隆抗体；通过间接ELISA技术和组织蛋白印迹对制备的多克隆抗体进行检测。试验结果表明，成功构建pET/Tf-C原核表达载体，并实现了蛋白的表达和纯化|制备的多克隆抗体效价大于1∶25 600，并能特异性地识别来源于黄鳝不同组织的血清转铁蛋白。研究结果对黄鳝血清转铁蛋白功能的研究奠定了基础