仿刺参补体AjC3部分基因的原核表达及多克隆抗体的制备

通过制备仿刺参补体C3(AjC3)多克隆抗体,为进一步研究仿刺参补体AjC3免疫机制奠定基础.利用PCR技术扩增AjC3部分基因片段(4556~5110 bp),将该片段与原核表达载体pGS-21a连接.将重组表达质粒转化到Transetta(DE3)中经IPTG诱导表达.表达的重组蛋白经镍柱纯化后,作为抗原免疫小鼠制备AjC3多克隆抗体.分别用间接ELISA,Western blot检测抗体的效价和特异性.结果显示,PCR扩增得到约555 bp的目的片段,重组蛋白分子量大小约56 ku;间接ELISA检测抗体效价达1:25600,Western blot结果显示,多克隆抗体具有良好的特异性.该试验成功的制备了补体AjC3多克隆抗体,为补体AjC3的进一步研究提供了检测工具