地高辛逆转乳腺癌MCF-7/阿霉素细胞的耐药性及其机制

本研究旨在探究地高辛对乳腺癌MCF-7/阿霉素(ADR)细胞耐药性的影响，并探讨其分子机制。将正常培养的MCF-7和MCF-7/ADR细胞分别设为对照组和ADR组；经地高辛(100 nmol/L)处理48 h后的MCF-7/ADR细胞为ADR + digoxin组；用shRNA技术沉默HIF-1α基因的MCF-7/ADR细胞为shHIF-1α组，并设置对照组为shcontrol组。采用CCK-8法检测ADR的细胞毒作用，以测定IC50与耐药指数；用RT-PCR法检测缺氧诱导因子-1α (HIF-1α)和多药耐药基因1 (multidrug resistance-1, MDR1)的mRNA水平；用Western blot方法检测HIF-1α和MDR1蛋白的表达水平；用流式细胞术检测细胞凋亡。结果显示，ADR组细胞对ADR的耐药指数高达115.6，地高辛使其耐药指数下降至47.2 (P < 0.05)；ADR组细胞中HIF-1α与MDR1的mRNA和蛋白水平均高于对照组细胞(均P < 0.05)，而地高辛可显著降低ADR组细胞HIF-1α与MDR1的蛋白水平，以及MDR1的mRNA水平(P < 0.05)，但对HIF-1α的mRNA水平无明显影响；经shRNA干扰HIF-1α基因表达后，HIF-1α和MDR1的蛋白水平均显著降低(P < 0.05)；沉默HIF-1α基因能显著增强ADR对ADR组细胞的促凋亡作用(P < 0.05)。地高辛可有效地诱导shcontrol组和shHIF-1α组细胞凋亡(P < 0.05)，但二组之间无显著差异。以上结果提示，地高辛可通过下调HIF-1α蛋白表达从而在转录水平抑制MDR1的表达，也可通过不依赖HIF-1α的通路诱导MCF-7/ADR细胞凋亡，进而在一定程度上逆转MCF-7/ADR细胞的耐药性。