一种手动解离、免疫磁珠分选加TIC培养液改良的小鼠原代海马小胶质细胞培养法

本文旨在研究手动解离、免疫磁珠分选加TIC培养液改良原代小胶质细胞的培养方法，获得高活性、高纯度且与在体状态更接近的小鼠海马原代小胶质细胞，以用于小胶质细胞的相关研究。选取2~4周龄SPF级C57BL/6J小鼠，PBS灌注后取海马组织剪碎，使用成年鼠脑组织解离试剂盒手动解离海马组织，获得单细胞悬液，再经去碎片试剂去除髓鞘等组织碎片。在4 °C 孵育CD11b免疫磁珠15 min后，细胞悬液经免疫磁珠细胞分选(magnetic activated cell sorting, MACS)两次过柱提高小胶质细胞纯度。将分选后细胞离心重悬，种在多聚赖氨酸包被后的24孔培养板中，用完全培养基或TIC培养液(以TGF-β、IL-34和胆固醇为主要营养成分的无血清培养基)培养4 d后进行其他检测。结果显示：(1)使用成年鼠脑组织解离试剂盒手动解离可得到含有(56.03 ± 2.10)%活细胞的单细胞悬液；(2)与免疫抗体包被筛选法(immunopanning)相比，经过MACS两步分选后，可得到更多且纯度高达(86.20 ± 0.68)%的小胶质细胞；(3)使用TIC培养液培养4 d后，可获得分枝状、形态类似静息状态的原代小胶质细胞；(4) qRT-PCR检测显示，与完全培养基培养相比，TIC培养液培养的小胶质细胞在4 d和7 d后TNF-α、IL-1β及CCL2 mRNA表达水平更接近急性分离后的小胶质细胞。上述结果提示，采用手动解离海马组织，经MACS两步分选及TIC培养后，可以获得高纯度、高活性且接近在体静息状态的小胶质细胞。