批量分离玉米活性精细胞方法的某些改进

目前,从玉米花粉中分离活性精细胞时,若用半乳糖作低渗介质,虽然得率较高,但是花费较大;若以蔗糖为介质,花粉胀破率(约50%)与精细胞得率(17%左右)均较低。而且,所用的Percoll不连续密度梯度离心,对于大批量分离操作繁琐。通过4种不同方法对玉米花粉的胀破效果的比较,发现经BKS35温育后再以蔗糖低渗缓冲液处理,花粉胀破率可提高到95%以上。该花粉胀破液经过滤,用30%Percoll溶液离心分离精细胞,得率达23.4%。用这种改进的批量分离方法,6h内可从100g新鲜花粉中获得约1.2×10~(8)生活精细胞。它不仅提高了产率,以满足玉米精细胞表膜特异蛋白生化分析的需要,而且还简化了操作,更具有经济节省等优点。