SDS-PAGE法测定His-tag融合蛋白分子量产生偏差的原因

研究一个His-tag融合蛋白P73-His时,首先用SDS-PAGE法测得其分子量确实比理论计算值大,然后对其进行C末端氨基酸顺序测定、电喷雾质谱分析,结果证实其实际分子量与理论值一致。酶切去除包括His-tag在内的部分肽段使SDS-PAGE法测量蛋白分子量的偏差大大降低,证实His-tag确实是造成偏差的原因之一。推测由于His-tag中的碱性氨基酸的作用造成蛋白在SDS-PAGE中迁移变慢,而导致偏差。这一现象值得引起有关研究者的注意。