高粱NADP苹果酸脱氢酶的纯化及其分子特性

用Sephadex G-100柱和制备性等电聚焦电泳纯化了高粱叶片NADP苹果酸脱氢酶, 得到电泳均一的酶制剂, 酶比活力提高350倍。天然酶含有两个分子量为4万 D的亚基。动力学研究结果, 求得各底物及辅酶的米氏常数分别如下: Km(OAA)=31μmol/L; Km(NADPH)=48μmol/L; Km(Mal)=11mmol/L; Km(NADP)=45μmol/L。NADP为NADPH的竞争性抑制剂, 抑制常数 K.=190μmol/L。NADP苹果酸脱氢酶在体外的激活需DTT。DTT对该酶的激活受 一小分子蛋白、NADP及离子强度所调节。图9表1参22