抑制Beclin 1促进H2O2诱导的神经胶质瘤U251细胞凋亡

氧化应激能够引起细胞自噬和凋亡同时发生，但其中细胞自噬的作用仍不十分明确，研究表明Beclin 1作为调节前自噬体形成的关键基因，参与了胶质瘤氧化应激的损伤过程。为了探讨自噬在H2O2引起的神经胶质瘤U251细胞损伤中的作用，本文应用真核细胞转染技术将Psilencer3.1-siRNA-Beclin 1重组质粒转入人神经胶质瘤U251细胞，同时分别设立转染空质粒阴性对照组和转染试剂阴性对照组。于24 h后收集细胞，分别提取细胞总蛋白，通过Western blot检测Beclin 1、Bcl-2和Bax蛋白表达，鉴定转染效率。应用1 mmol/L H2O2作用Beclin 1-siRNA细胞株，单丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine, MDC)染色检测细胞自噬空泡的变化；Western blot检测自噬蛋白LC3表达；流式细胞仪PI/Annexin V-FITC双染色法检测细胞凋亡率。结果显示，Beclin 1-siRNA重组质粒明显降低Beclin 1蛋白表达，并且对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达无明显影响；与正常对照组相比，1 mmol/L H2O2作用的神经胶质瘤U251细胞自噬空泡明显集聚，LC3-II蛋白表达增强，细胞凋亡率增加(P < 0.05)；与1 mmol/L H2O2组相比，转染Beclin 1-siRNA质粒后降低了H2O2引起的自噬空泡集聚，LC3-II蛋白表达下降，但细胞凋亡率显著增加(P < 0.05)；H2O2与自噬特异性抑制剂3-methyladenine (3-MA)联合应用时，U251细胞凋亡率亦显著增加(P < 0.05)。上述结果表明，Psilencer3.1-siRNA-Beclin 1转染神经胶质瘤U251细胞后，可有效抑制Beclin 1的蛋白表达，降低H2O2引起的细胞自噬水平，增加细胞凋亡率，与添加自噬抑制剂3-MA的结果一致。本研究提示自噬在氧化应激过程中是一种细胞的自我保护机制，抑制自噬促进了细胞凋亡的发生。