胰蛋白酶消化强度优化获得高纯度体外培养的星形胶质细胞

本文旨在观察胰蛋白酶消化对体外培养的星形胶质细胞纯度的影响，优化星形胶质细胞培养方法。常规分离新生SD大鼠大脑皮质，分别用0.25% 胰蛋白酶消化20、30和40 min制备单细胞悬液并接种细胞。细胞长满瓶底时进行恒温摇床振荡，各组再分为常规消化的对照组和二次胰蛋白酶消化组进行传代纯化。倒置相差显微镜观察细胞生长情况，MTT法检测细胞增殖，GFAP免疫荧光分析星形胶质细胞纯度并观察其形态，流式细胞术分析细胞凋亡。结果显示，胰蛋白酶消化20 min的细胞在原代培养9 d长满瓶底。在本研究中，延长胰蛋白酶消化时间至30 min，细胞增殖更快，培养7 d即可铺满瓶底，且星形胶质细胞形态正常，纯度达(70.2 ± 4.0)%，较20 min组有显著性提高（P < 0.01）。40 min组虽然星形胶质细胞纯度也较20 min组有所提高，但细胞增殖缓慢且损伤明显。在恒温摇床振荡结束后，进行二次胰蛋白酶消化可减少传代后杂细胞数量。二次胰蛋白酶消化组第一代（P1）的GFAP阳性率普遍高于对照组，其中30 min+二次胰蛋白酶消化组GFAP阳性率最高，达到(98.1 ± 1.7)%，相当于20 min+对照组P3水平，且二者的凋亡率无显著性差异。以上结果表明，胰蛋白酶消化30 min+二次消化能有效提高星形胶质细胞纯度，缩短原代培养及纯化时间，是体外快速获得高纯度星形胶质细胞的有效方法。