活化素抑制大鼠垂体GH3细胞中人生长激素基因启动子的活性

本研究旨在探讨活化素(activin)对大鼠垂体GH3 细胞中人生长激素(hGH)基因启动子活性的影响及其可能的调节机制。采用荧光素酶报告基因方法。首先建立含hGH 基因启动子(-484~+30 bp)和荧光素酶融合基因的稳定转染GH3 细胞株，然后加入活化素或同时加入活化素与相关信号转导途径的激动剂，通过检测细胞培养液和细胞裂解液中GH 的含量，以及GH3 细胞内荧光素酶的变化，反映活化素对GH 分泌、合成和hGH 基因启动子活性的影响。将含不同长度hGH 基因启动子序列的荧光素酶表达质粒分别转染GH3 细胞，观察它们对活化素的反应，寻找活化素影响hGH 基因启动子活性的关键DNA序列。结果表明，活化素(5, 50 nmol/L)能抑制大鼠垂体GH3 细胞中GH 的分泌和合成，活化素(5, 50 nmol/L)还能够抑制GH3 细胞中hGH 基因启动子的活性，使之仅达对照组的77% 和69%；在胞内信号转导激动剂中，丝裂原活化蛋白激酶激酶(MAPKK/MEK)特异性激动剂C6 ceramide (1 μmol/L)完全取消了活化素对hGH 基因启动子活性的抑制作用；活化素发挥抑制作用所需要的hGH 基因启动子关键序列位于-132~-66 bp 之间。上述研究表明，活化素能抑制大鼠垂体GH3 中hGH基因启动子的活性，它可能是通过抑制细胞内依赖MAPK 的信号转导途径来完成的，同时hGH 启动子上-132~-66 bp 的序列在其中发挥重要的作用。