大鼠肾小球分离和离体培养方法的建立

本文旨在建立大鼠肾小球分离和离体培养的实验方法。应用差异过筛法分离技术分离大鼠肾小球，用IV型胶原酶消化法去除Bowman囊，用相差显微镜观察肾小球纯度和形态结构，台盼蓝拒染法检测肾小球的活性，双标免疫荧光技术鉴定肾小球固有细胞的标志蛋白nephrin和α-SMA的表达分布，荧光显微镜和酶标仪检测Ang II对离体培养肾小球ROS水平的影响，real-time PCR方法观察离体培养的肾小球中TGF-β1 mRNA和collagen IV mRNA的水平。结果显示，离体培养的肾小球结构完整，无包囊，毛细血管袢结构清晰；离体培养48 h后，肾小球内细胞仍具有活性；激光共聚焦显微镜下可见肾小球内足细胞和间质细胞的标志蛋白nephrin和α-SMA表达清晰；给予离体培养的肾小球Ang II刺激后，肾小球ROS的产生明显增加，TGF-β1和collagen IV mRNA水平升高。以上结果提示，大鼠肾小球的分离及离体培养技术建立成功，该分离方法获得的肾小球可以进行离体培养及药物作用观察，为基础和临床研究提供实验技术和研究手段。